تحليل كروماتوجرافي انجذابي

التحليل الكروماتوجرافي الانجذابي Affinity chromatography، هي إحدى طرق فصل الجزيئات، عن طريق استخدام قدرتها على الارتباط بطريقة معينة بالجزيئات الأخرى. وتعتبر هذه الطريقة ذات استخدام خاص في فصل الجزي البيولوجي. وذلك لأن الكثير من الجزيئات البيولوجية ترتبط بقوة، وبطريقة معينة مع الجزيئات الأخرى – ركائزها، كوابحها، منظماتها، روابطها .. الخ. (الرابط هوجزئقد يكون عادة صغيرا أومجموعة صغيرة من الجزيئات ترتبط بجزئ كبيرقد يكون عادة بروتينا. ويمكن اعتبار ركائز الانزيمات كروابط، حيث انها ترتبط بالانزيم. وبالرغم من أنه لا يعتقد أنها تسلك هذا الطريق، لأنها بمجرد حتى ترتبط ، فانها تتحول الى جزئ آخر).

الأنواع

Column chromatography

Batch chromatography

وهناك نوعان من التحليل الكروماتوجرافي الانجذابي البيولوجي:

الأول: إما حتى يتجه الجزئ الحيوي، والجزئ الأصغر الذي يرتبط به، يمكن حتى يلتصق به فيما بعد.

الثاني: أوحتى يتجمد الرابط الأصغر ويلتصق الجزئ الأكبر به ، (وبالطبع فان اللاصق والملتصق، قد يحدثان جزيئين عضويين أيضا). والشكل المتغير، هوعن طريق استخدام جسم مضاد كجزئ متجمد واستعماله في الامساك بموروثه المضاد، وهذه العملية تسمى غالبا التحليل الكروماتوجرافي الانجذابي المناعي.

وتشتمل الجزيئيات البيولوجية المستخدمة في فصل الجزيئات الأصغر على:

1- الانزيمات: لفصل الركائز (وتستخدم في حالة ما اذا كانت احدى الركائز غائبة عن الخليط، والا فان الانزيم سيحطم ما تقوم بفصله).

2- الأجسام المضادة: وتستخدم في فصل أي جزئ أومجموعة جزيئات من خليط مركب.

3- اللكتينات: وهي بروتينات تربط سكريات معينة بطريقة قوية. وتستخدم لهذا السبب في فصل الكربهيدرات وأي شئقد يكون مرتبطا بالكربوهيدرات.

والشكل المغير، يأتي في التحليل الكروماتوجرافي للانجذاب المزيف، اذقد يكون هناك مركب مشابه للرابط البيولوجي،قد يكون متجمدا على مادة صلبة، وتكون الانزيمات اوالمواد الأخرى مرتبطة به. وهناك سلسلة من الصبغات العضوية المركبة، تعتبر نشطة جدا في الارتباط ببعض أنواع الانزيمات (خصوصا Dehydrogenises) ، بسبب تشابهها مع ركائز الانزيمات الحقيقية نيكوتين أدينين ثنائي النيكلوتيد NAD أو[[نيكوتين أميد أدنين ثنائئ النيكلوتيد فوسفات NADP – ثاني نيكلوتيد أدنين أوفوسفاته (2). ويسمى هذا أيضا بالتحليل الكروماتوجرافي الانجذابي للرابط الصبغي. وتشتمل الطرق الأخرى على التحليل الكروماتوجرافي الانجذابي للمعدن. حيث يثبت أيون المعدن، على نادىمة صلبة، ترتبط الأيونات المعدنية بشدة وطريقة موضوعية بالكثير من الجزيئيات الحيوية ، ويرتبط أيون المعدن بكلاب أومجموعة مخلبية، وهي تلك المجموعة الكيميائية التي ترتبط بالمعدن. ويكون هذا المعدن مرتبطا بها بشدة.

وتستخدم سلسلة كبيرة من المواد النادىمية، في التحليل الكروماتوجرافي الانجذابي.

ولكي تنتج مادة انجذابية، فان المادة النادىمية الصلبة، سيرتبط بها الشريك الرابط، يجب حتى تكون نشطة كيميائيا. وفي هذه العملية يتم أخذ مادة كيميائية متجمدة، وتضاف اليها مجموعة كيميائية متفاعلة بحيث انه عند اضافة الجزئ الرابط الانجذابي الى المادة النادىمية، فانه يتفاعل معها، ليكون رباطا تساهميا، والا فان المادة الانجذابية، تمحى تماما.

التطبيقات

يستخدم التحليل الكروماتوجرافي، على نطاق واسع في مجال الأبحاث، كما يستخدم في عمليات الانتاج ، بالرغم من حتى المواد تكون عادة مكلفة، عند استخدامها على نطاق واسع في عمليات التنقية، ويستخدم التحليل الكروماتوجرافي عندماقد يكون هناك منتج ذوقيمة، يرغب في فصله عن خليط مركب من المواد الكيمائية المتشابهة، والتيقد يكون فيها المنتج هوالمكون الأصغر. ومن ثم قامت شركة أرمور للدوائيات وشركة باكستر للرعاية الصحية بفصل المعامل (VIII) الذي يستخدم في علاج الهيموفيليا من الدم باستخدام التحليل الكروماتوجرافي الانجذابي. وذلك بربط جسم مضاد على عمود من المادة الصلبة، وجعل البلازمات تعبر فوقه، ويستطيع المعامل (VIII) حتى يلتصق، بينما لا تلتصق البروتينات الأخرى. ويكون الناتج على درجة عالية من النقاوة.