رحلان كهربائي للهلام
| الرحلان الكهربائي للهلام Gel electrophoresis | |
|---|---|
|
Gel electrophoresis apparatus - An agarose gel is placed in this buffer-filled box and electrical field is applied via the power supply to the rear. The negative terminal is at the far end (black wire), so DNA migrates toward the camera.
| |
| التصنيف | رحلان كهربائي Electrophoresis |
| تقنيات أخرى | |
| متعلقات |
رحلان كهربائي شعري SDS-PAGE Two-dimensional gel electrophoresis Temperature gradient gel electrophoresis |
الفصل الكهربائي للهلام Gel electrophoresis هي عملية فصل جزيئات الدنا أوالرنا أوالبروتينات باستخدام مجال كهربائي مطبق على موجدة هلام gel matrix. وعادة ما يـُجرى الرحلان الكهربائي للهلام لأغراض تحليلية، وكثيرا ماقد يكون ذلك بعد تكبير الدنا عن طريق PCR، ولكن يمكن استخدامه أيضاً كتقنية اعداد قبل استخدام طرق أخرى مثل مطيافية الكتلة وRFLP, PCR والاستنساخ وسلسلة الحمض النووي، أو اللطخة الجنوبية للمزيد من التشخيص.
الفصل
يتم فصل بروتينات عينة من الأنسجة أوالخلايا باستخدام الرحلان الكهربي. فصل البروتينات قد يحدث باستخدام نُقْطَةُ تَساوِي الكَهْرَبِية Isoelectric point (pI)، الوزن الجزيئي، الشحنة الكهربائية، أومجموعة من هذه العوامل. طبيعة الفصل تعتمد على طريقة معالجة العينة وطبيعة الهلام.
إلى حد الآن، الطريقة الأكثر شيوعاً للفصل الكهربائي للهلام توظف هلامات متعدد الأكريلامايد polyacrylamide ومحاليل تحتوي على دودسيل كبريتات الصوديوم Sodium Dodecyl Sulfate (SDS).
SDS-PAGE أي (الفصل الكهربائي لهلام دودسيل كبريتات الصوديوم متعدد الأكريلاميد SDS-Polyacrylamide Gel Electrophoresis) تحافظ على سلسلة البروتينات في حالة متمسخة denatured state حالماً تتم معالجتها مع عوامل اختزال قوية للقضاء على الأشكال الثانوية والثالثية. (مثل تحويل الروابط ثنائية الكبريت S-S إلى SH وSH) وبذلك يسمح لفصل البروتينات حسب وزنها الجزيئي. يتم تغطية البروتينات في العينة بدودسيل كبريتات الصوديوم السالبة الشحنة ونقلها إلى القطب الكهربائي الموجب الشحنة خلال شبكة الأكريلاميد في الهلام.
البروتينات
البروتينات الصغيرة تهاجر أسرع خلال هذه الشبكة وبذلك يتم فصل البروتينات حسب الحجم (عادة ما يتم قياسها بالكيلودالتون، kD، kiloDaltons). هجريز الأكريلاميد يحدد دقة الهلام - حدثا زاد هجريز الأكريلامايد حدثا زادت دقة البروتينات ذات الأوزان الجزيئية العالية. البروتينات تهاجر ببعد واحد خلال الهلام لأغلب البقع.
يتم تحميل العينات في آبار في الهلام. يتم حفظ إحدي الأسطر للـ مدروج أوالعلامات، وهما خليط متوفر تجارياً من عدة بروتينات معروفة الوزن الجزيئي، عادة ما تكون مصبوغة لكي تُظهر حزم ملونة مرئية. أحد الأمثلة على الدرج، هودرج الأوزان الجزيئية الكامل المدى لشركة GE (كما في الشكل). عندما يتم تطبيق فرق الجهد على الهلام، تهاجر البروتينات ضمنه بسرع مختلفة. هذه المعدلات الزمنية المتنوعة للتقدم (حركات الفصل الكهربائي المتنوعة) تُفصل إلى حُزم ضم جميع سطر.
من الممكن أيضاً استخدام الفصل الكهربائي ثنائي الأبعاد الذي يفصل البروتينات من عينة واحدة في بُعدين. البروتينات تفصل بحسب النقطة متوازنة الكهربة (هجريز أيونات الهيدروجين pH الذي تكون فيه الشحنة متعادلة) في البعد الأول، وبحسب الوزن الجزيئي في البعد الثاني.
انظر أيضاً
- Affinity electrophoresis
- DNA electrophoresis
- Electrofocusing
- Gel isolation
- Native Gel Electrophoresis
- QPNC-PAGE
- Northern blotting
- Protein electrophoresis
- SDS PAGE
- Two-dimensional gel electrophoresis
- بلوت غربي
- بلوت جنوبي
- سلم الدنا
- اختبار المذنب
- Zymography
الهامش
- ^ Berg JM, Tymoczko JL Stryer L (2002). (5th ed.). WH Freeman. ISBN .
وصلات خارجية
- Biotechniques Laboratory electrophoresis demonstration, from the University of Utah's Genetic Science Learning Center
- Discontinuous native protein gel electrophoresis
- Drinking straw electrophoresis
