الاستشراب اللوني بالطبقة الرقيقة(TLC) أوكروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة

الكروماتوگرافيا أوالتفريق اللوني هي طريقة لفصل وتنقية المواد الكيميائية المختلطة. وفي كروماتوگرافيا الطبقة الرقيقة نقوم بفصل الخليط لفهم ألوانه لكن لا نحصل على مادة اللون بشكل محسوس حيث إذا استخدامنا لل TLC أو(Thin Layer Chromatography) بهدف التعهد على مواد لون النبتة بشكل دقيق أكثر .

لوح TLC أو(Thin Layer Chromatography): من طرفها الخلفي موجود معدن الألمنيوم أوالحديد، ويتم تغطية هذه الطبقة أما بـ :

• أكسيد ألمنيوم- هوالوسط الساكن في التجربة (الألومينا) وأكسيد ألمنيوم ورمزه الكيميائي Al2O3، ويوضع على طبقة الألمنيوم مسحوق الالومينا وهوليس له وظيفة في عملية الكروماتوغرافيا إلا انه يستعمل لكي تلتصق به الطبقة الأخرى.
• السيليكا.

مقدمة

كرماتوگرافيا الفصل بالطبقة الرقيقة ([TLC]) هي تقنية تستخدم ل فصل مخاليط من المكونات. وذلك عن طريق:

الطور الثابت:

ويكون ذلك على لوح مغلف بطبقة رقيقة من المواد الممتزة على لوح من البلاستيك ، اوالزجاج، أورقائق الألومنيوم، وهي وعادة هلام السيليكا، أكسيد الألومنيوم، أوالسليلوز (نشافة الورق). ومن المعروف هذه الطبقة من الممتزة تعهد بالطور الثابت. ويستخدم الفصل اللوني لفصل خليط من المواد إلى مكوناتها.

الطور المتحرك

سائل معتمدة على الطور الثابت. والطور المتحرك يتدفق عبر الطور الثابت ويحمل مكونات الخليط معه. المكونات المتنوعة تسافر بمعدلات مختلفة. وذلك عبر الطبقة الرقيقة المغلفة بهلام السيليكا أوالألومينا على بترة من المعدن، الزجاج أوالبلاستيك القوي.

فروق TLC عن كروماتوغرافيا العمود

هنالك فروق متعددة ما بين طريقة الفصل "كروماتوغرافيا العمود" وطريقة الفصل "كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة “ ومن بينها :

• في كروماتوغرافيا العمود نقوم بفصل المواد المكونة للخليط عملياً ونستطيع في النهاية الحصول على جميع مادة بشكل منفرد, أما في كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة فلا نستطيع الحصول على المواد منفصلة لأنها تظل على الورقة، اوبعبارة أخرى لا نستطيع استخلاص مواد من خلال كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة لكن في كروماتوغرافيا العمود نستطيع الحصول عليها.
• بالإضافة إلى انه في كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة نحصل على مواد الخليط بشكل أدق من كروماتوغرافيا العمود (حدث ذلك معنا لقصر عمود الكروماتوغرافيا، وكذلك لان عملية فصلنا للمواد كان محصورة بوقت قصير فلوانتظرا يومان أوثلاثة من الممكن حتى نحصل على المواد بشكل أدق)

• نستطيع حتى نستعمل ال [TLC] لان عملية الفصل بين المواد فيها أسرع أي بحاجة إلى وقت اقل من كروماتوغرافيا العمود، ففيخمسة دقائق تقريبا حصلنا على مركبات الخليط وعهدنا مركباته (في كروماتوغرافيا الـ [TLC])، أما في كروماتوغرافيا العمود فنحتاج إلى وقت أكبر للفصل بين المواد.

• في كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة [TLC] نقطة واحد من الخليط تكفينا لكي نفصل مركباته مما يجعلنا نوفر كمية الخليط المستخدمة في التجربة حيث أننا نستطيع استخدام الكمية المتبقية منه، أما في كروماتغرافيا العمود فنحتاج إلى كمية كبيرة جدا مقارنة بال [TLC].

التقنية العملية

عملية مماثلة لكروماتوغرافياالورق مع ميزةالسرعة،الفصل ألافضل ، والاختيار بين مراحل مختلفة ثابتة. بسبب بساطته وسرعته غالبا ما تستخدم[TLC] لرصد تفاعل كيميائي وللتحليل النوعي لمنتجات التفاعل.

الطريقة

• نضع نقطة اوبقعة صغيرة من المحلول تحتوي على العينة على اللوح الرقيق، حوالي 1.5 سم من الحافة السفلى. والمذيب يسمح له بالتبخر التام ، وإلا يفترض أن يتحقق فصل سيئ للغاية أولا يحدث فصل . إذا تم استخدام مذيب غير متطائر لاذابة العينة، لا بد من تجفيف لوح الفصل في الحاوية الفراغية.

• وهناك كمية من مذيب مناسب تمثل الطور المتحرك تسكب في كأس زجاجي أوأي حاوية شفافة مناسبة (غرفة الفصل) إلى عمق أقل من [1] سنتيمتر. يتم وضع شريط من ورق الترشيح (ويعهد أيضا باسم "الفتيل") في غرفةالفصل، بحيث تلامس القاع المذيب، وتمس جدار غرفة الفصل وتصل تقريبا إلى قمة الحاوية. يتم إغلاق الحاوية بغطاء من الزجاج أوأي غطاء آخر ويهجر لبضع دقائق للسماح لأبخرة المذيبات تصعد ورقة الترشيح وتشبع الهواء في الغرفة. (عدم تشبع الغرفة سيؤدي إلى فصل ضعيف والنتائج غير قابلة للتكرار).

• ثم يتم وضع لوح في قاع TLC بحيث البقعة (ق) من العينة لا تلمس سطح الطور المتحرك في الغرفة، ويتم إغلاق الغطاء. والمذيب يتحرك صعودا اعلى اللوح بالخاصية الشعرية، ويجتمع خليط العينة ويحمل عنه لوحة (elutes العينة). عندما يصل المذيب القمة يجب إزالة اللوح لان(استمرار الشطف يفترض أن تعطي نتيجة مضللة) والمجففة.

عملية الفصل

• المركبات الكيميائية المتنوعة في العينة الخليط تهاجر بمعدلات مختلفة بسبب الاختلافات في الفتها نحوالطور الثابت، وبسبب الاختلافات في قابليتها للذوبان في المذيبات . عن طريق تغيير المذيبات، أومن الممكن باستخدام مزيج، وفصل مكونات يقاس [عامل التخلف | R الفرعي] القيمة يمكن تعديلها.
• أيضا، يمكن استعمال الفصل يتحقق مع لوحة TLC لتقدير انفصال فلاش اللوني معرض العمودويستند الفصل بين المركبات على المنافسة من المذاب والطور المتحرك عن أماكن ملزمة للفترة ثابتة.
• على سبيل المثال،يمكن استعمال هلام السيليكا في الفترة الطبيعية كفترة ثابتة ونظر فيه القطبية. نظرا الي الاختلاف في الاستقطاب، فالمركب ألاكثر قطبية يحتوي على تفاعل أقوى مع السيليكا، وبالتالي أكثر قدرة على تبديد الطور المتحرك من أماكنه . وبالتالي، فإن العنصر الأقل قطبية يتحرك على مستوى اعلى لوحة (مما أدى إلى ازدياد قيمة RF).
• إذا تغير الطور المتحرك إلى المذيبات القطبية أكثر أوخليط من المذيبات، فمن أكثر قدرة على تبديد المواد المذابة من الأماكن والمركبات ملزمة السيليكا جميع شيء على لوحة TLC يفترض أن تتحرك على مستوى اعلى لوحة.
• السائد القول ان "المذيبات القوية" (elutants) مركبات اكثر دفعا خلال لوح التحليل ، في حين حتى "المذيبات الضعيفة" elutants تتحرك بصعوبة بالغة . ترتيب القوة / الضعف يعتمد على طلاء (الطور الثابت) من لوحة TLC . لوحات هلام السيليكا TLC المغلفة، ويزيد من قوة elutant وفقا للترتيب التالي:
• Perfluoroalkane (أضعف)، الهكسين، بنتان، رابع كلوريد الكربون، البنزين / التولوين، ثنائي كلوروميثان، ايثر، Ethylacetate، الأسيتونيتريل، الأسيتون، 2-بروبانول / N-بيوتانول ، المياه، الميثانول، الترايثلامين، حمض الخليك، حمض الفورميك (أقوى). ل C18 لوحات مطلية النظام هوعكس ذلك.
• عمليا هذا يعني أنه إذا كنت تستخدم خليط من اسيتات والهكسان والطور المتحرك، مضيفا النتائج خلات الإيثيل أكثر في قيم أعلى الترددات اللاسلكية لجميع المركبات على لوحة TLC. تغيير قطبية الطور المتحرك وعادة لا يؤدي إلى عكس ذلك من تشغيل للمركبات على لوحة TLC . إذا سلسلة eluotropic يمكن حتى تستخدم كدليل في اختيار الطور المتحرك. إذا هوالمطلوب من نظام تشغيل عكس من المركبات، يجب استخدام فترة عديم الأقطاب ثابتة، مثل C18-functionalized السيليكا.

• مثالا على ذلك اللوني من مستخرج من أوراق خضراء (على سبيل المثال السبانخ) فيسبعة مراحل التنمية. كاروتين أزل بسرعة ومرئيا فقط حتى المستوى 2. الكلوروفيل A وB في منتصف الطريق في المستوى الأخيرة وتين في تلطيخ أول مركب الصفراء

المراجع

انظر أيضاً

• كيمياء تحليلية
• استشراب
• استشراب غازي
• استشراب سائل عالي الأداء