صبغة گرام

بكتريا الجمرة الخبيثة جرام-موجب (عصي قرمزية) في عينة cerebrospinal fluid. لوتواجد، فإن أنواع البكتريا سلبية جرام ستظهر وردية. (الخلايا الأخرى هي كريات دم بيضاء).

Staphylococcus aureus (جرام موجب)

Escherichia coli جرام سالب

تعتبر صبغة جرام (بالإنجليزية: Gram stain) من أبرز أنواع الصبغات المستخدمة في المستشفيات للتعهد على البكتريا . ويعود الفضل في اكتشافها إلى الطبيب الدانماركي هانز كرستيان گرام (Hans Christian Gram) الذي كان يعمل في مختبر التشريح التابع لمستشفى برلين في العام 1880 للميلاد. حيث قام بطوير هذه الطريقة لتساعده على تفرقة أنواع البكتيريا المسببة لذات الرئة (Pneumonia)، حيث كانت أحد أنواع البكتريا تصبغ بلون أحمر وأطلق عليها (بكتيريا سالبة جرام) والأخرى باللون الأزرق (بكتيريا موجية جرام). ويعتمد لون البكتيريا في صبغة جرام على الهجريب الكيميائي لجدار الخلية.

البكتيريات المتنوعة تتفاعل بشكل متفاوت مع كيفية التلوين. لذلك تنقسم البكتيريات إلى:

گرام-موجبة: وتتلوّن إجمالًا باللون الأزرق الغامق

گرام-سالبة: تظل عبر غرام دون تلوين - وإنّما تلوّن باللون الأحمر عبر الفوكسين

ينتج عن ذلك تشخيص مختلف حسب سماكة الجدار الخلويّ للبكتيربا المعيّنة وبالتالي أدوية مختلفة للعلاج. البكتيريات السالبة والموجبة تتجاوب إذًا بشكل مختلف مع المضادّات الحيويّة. بهذه الكيفية التي تستغرق القليل من الوقت (تقريبًا خمس دقائق) يستطيع المرء حتى يحدّد التصرّف البكتيريّ حسب غرام وبالتالي حتى يحدّد طريقة البدء مباشرة بعلاج غالبًا ماقد يكون منقذًا لحياة المريض حتّى قبل التحديد النهائيّ لنوع البكتيريا والذي يستغرق الكثير من الأيّام.

الطريقة

الكيفية تتألّف من ثلاث خطوات هي:

التلوين- إزالة التلوين- ثمّ التلوين المعاكس

1- في الفترة الأولى يتمّ التلوين ببنفسجيّ غنتيان (أوالمعروف بـ Methyl violet) المضاف إلى الفينول Phenol (المعروف تاريخيّا بالكاربول Carbol). البكتيريا الموجبة والسالبة حسب غرام تتلوّنان إذ ذاك .ثم تعالج البكتيريات بمحلول لوغول Lugol وتتكوّن حينها مركّبات من موادّ التلوين.

2- في المستوى الثانية -وهي المهمّة- يختلف تفاعل البكتيريات، فبعد العلاج بالكحول -إيتانول (96%)- تفقد البكتيريا السالبة لونها المكتسب بدايةً بينما لا تتخلّى الموجبة عن لونها الأزرق الغامق الذي اكتسبته.

ويعود هذا الاختلاف إلى بناء الجدار الخلويّ لديهما فالبكتيريا السالبة تملك طبقة هزيلة من الموريين Murein لكن فوقها طبقة فوسفوليبيد Phospholipid.

بينما يتوفّر لدى الموجبة غلاف سميك من الموريين متعدّد الطبقات التي بينها يتجمّع محلول لوغول. وهناقد يكون تأثير الإيتانول مجفّفًا حيث تظل تجمّعات الألوان متوفّرةً في الجدار الخلوي.

هذه الفترة -أي العلاج بالكحول- تتوجّب بعض الخبرة لتحديد تشخيصٍ أكيدٍ.

3- المستوى الثالثة تضم تلوّن البكتيريات بمحلول ملطّف -أي قليل الهجريز- من الفوكسين المزاد إلى الفينول. (وبذلك ينتج اللون الأحمر لدى البكتيريات السالبة حسب تلوين غرام).

كما توجد طرق أخرى لفهم تصرّف البكتيريا حسب غرام مثل اختبار KOH.

كيفية تحضير صبغة جرام

كيفية تحضير صبغة جرام (الصبغ المركب) لصبغ البكتريا السالبة والموجبة:

(أ‌)صبغة الكريستال فايولت:

1-يذاب (1جرام) من بودرة كريستال فايولت قي (80 ملى كحول 85%) ثم يضاف (1جرام كالسيوم أكسالات) للمحلول السابق 2-يهجر المحلول لمدة 24 ساعة قي الحضان عند درجة حرارة 25 درجة 3-ثم يكمل المحلول السابق إلى (1 ليتر) بالماء المقطر ويهجر 24 ساعة أخرى قي الحضان عند نفس درجة الحرارة السابقة 4-يرشح المحلول بورق ترشيح للتخلص من بلورات الكالسيوم أكسالات الذائدة

ب‌)صبغة الصفرانين:

- يذاب (2 جرام) من بودرة الصفرانين قي (ا ليتر) ماء مقطر

(ج) محلول لوجل اليودى:

1- يوزن (ا جرام) من اليود بالإضافة إلى 2- يذاب (1 جرام) من يوديد البوتاسيوم قي (300 مل) ماء مقطر